NOTIZIA IN BREVE
La stessa reazione può etichettare proteine vicine al recettore sia fuori sia dentro la cellula.
Il metodo è stato usato nel cervello vivo del topo.
Ha rivelato una relazione prima non caratterizzata tra recettore GABAA e CAMKV.
PERCHÉ CONTA
Le proteine di membrana coordinano segnali tra l'esterno e l'interno della cellula, ma i due lati sono difficili da studiare insieme in tessuto vivo.
Poter osservare lo stesso vicinato molecolare attraverso la membrana può rendere più completa la mappa dei circuiti di segnalazione.
CHE COSA È ORA POSSIBILE
Researchers gained simultaneous access to molecular neighbourhoods across the plasma membrane around a chosen receptor in living brain tissue.
COSA LO HA RESO POSSIBILE
Un fotosensibilizzatore fissato all'esterno produce ossigeno singoletto quando illuminato. Questa specie reattiva attraversa la membrana e permette di marcare proteine vicine anche sul lato interno.
LA STORIA
Per capire con chi interagisce un recettore di membrana, i ricercatori spesso devono scegliere: studiare il lato esterno oppure quello interno della cellula. Un nuovo metodo chimico ha superato questa separazione in tessuto cerebrale vivo.
tmPhoxID ancora un fotosensibilizzatore vicino al recettore scelto. Un impulso di luce produce ossigeno singoletto, abbastanza permeabile da attraversare la membrana e innescare la marcatura di proteine vicine su entrambi i lati.
Nel cervello vivo del topo, il metodo è stato applicato a più recettori e ha ricostruito i loro vicinati proteici. L'analisi ha anche evidenziato un'associazione prima non caratterizzata tra il recettore GABAA e la proteina CAMKV.
La novità è nell'accesso alla misura: un singolo esperimento può seguire il contesto molecolare attraverso la membrana in un tessuto intatto, invece di ricostruirlo combinando tecniche separate.
Il metodo segnala prossimità, non dimostra automaticamente che ogni proteina identificata si leghi direttamente al recettore. E la dimostrazione in vivo è per ora nel topo, non nell'uomo.
COSA SAPPIAMO
La tecnica funziona nel cervello vivo del topo. [1]
Può etichettare proteine vicine sui due lati della membrana.
È stata usata su più recettori neuronali e ha trovato un'interazione precedentemente non caratterizzata.
COSA NON SAPPIAMO
Quanto bene generalizzi a molti altri recettori e tessuti.
Quale frazione dei segnali di prossimità corrisponda a interazioni dirette.
Quanto facilmente la tecnica possa essere usata in modelli umani più complessi.
COSA SUCCEDE ORA
La tecnica potrà essere applicata a recettori e tessuti diversi per verificare nuove reti molecolari e confrontarle con altri metodi di interattomica.
TRACCIA DELLE FONTI
tmPhoxID ha marcato proteine sui lati extra- e intracellulari di recettori selezionati nel cervello vivo del topo.
Il metodo è stato applicato a GRID2, recettori GABAA e GRM1 per mappare i loro interattomi vicini alla membrana.
Lo studio ha riportato un'interazione prima non caratterizzata tra recettore GABAA e CAMKV.
FONTI
- Transmembrane PhoxID: photoproximity labelling across the plasma membrane in vivoApri fonte
PROVE ATTUALI
EVIDENZA VALIDATA
COSA CAMBIEREBBE QUESTO?
- Repliche indipendenti che non confermino la marcatura transmembrana.
- Confronti ortogonali che mostrino un alto tasso di falsi vicini non informativi.